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血紅素鐵酸性丙酮提取法

發(fā)表時(shí)間:2022-05-19
血紅素鐵酸性丙酮提取法:使用酸性丙酮分離提取血紅素鐵的方法。
原理:血液中的血紅蛋白是由4分子亞鐵血紅素和1分子珠蛋白結(jié)合而成的。在pH> 3時(shí),亞鐵血紅素與珠蛋白結(jié)合最疏松。根據(jù)此化學(xué)性質(zhì),提取時(shí)先從血液中分離出血液,然后加水將血球液溶解,調(diào)節(jié)pH至3.0左右,加入適量丙酮,可使蛋白質(zhì)凝固,亞鐵血紅素則溶于丙酮液中。再加入醋酸鈉,鞣酸,稀堿或直接蒸餾,即可使血紅素鐵沉淀析出。
工藝:紅細(xì)胞加適量水,進(jìn)行機(jī)械攪拌細(xì)胞破碎30 min后,加入紅細(xì)胞5倍體積的3%的酸性丙酮溶液,用1 mol/L的鹽酸調(diào)溶液的pH至2~3,抽提10 min,離心收集上清液,加入1 mol/L的氫氧化鈉,待進(jìn)一步提取,提取方法有以下4種:
1、醋酸鈉法:加濾液量1%的醋酸鈉攪拌均勻,靜止,抽濾,取沉淀,用蒸餾水,無(wú)水乙醇,乙醚依次沖洗2次,除去雜質(zhì),干燥,回收丙酮;
2、蒸餾法:水浴回收丙酮,濾液濃縮后即產(chǎn)生沉淀,抽濾,干燥得到血紅素鐵成品;
3、稀堿抽提法:將酸性丙酮和血球混合液抽濾,濾液用酸性丙酮洗至淺灰色,合并濾液,用1mol/LNaOH溶液調(diào)pH至中性,析出沉淀,離心,取沉淀,用0.1 mol/L NaOH溶液溶解后離心,,取上清液,用1 mol/LHCl調(diào)pH至酸性,析出大量沉淀,離心,水洗沉淀3次至中性,干燥,得到血紅素鐵;
4、鞣酸鹽析法:向提取液中加入5%的鞣酸,攪勻靜置過(guò)夜,氯化血紅素呈針狀晶體析出,,離心收集沉淀,用蒸餾水洗滌3次,干燥后獲得氯化血紅素。
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